A new species of the genus Jenynsia from southern Brazil is described. The analyses of character states, primarily osteological, support the new species as belonging to the subgenus Plesiojenynsia. A new hypothesis of phylogenetic relationships for the genus, including the new taxon, is presented. The new species, from the Rio Iguaçu drainage in the Brazilian state of Paraná, is diagnosed by the following combination of characters: absence of mandibular canal pore W, long epiotic processes in adults, ten anal-fin rays, discontinuous midlateral and dorsolateral stripes formed by series of blotches on body, midlateral stripe discontinuous anterior to dorsal-fin origin, large third hypobranchial, and presence of teeth on fourth ceratobranchial of adults.

Uma nova espécie do gênero Jenynsia do sul do Brasil é descrita. As análises de estados de caracteres, principalmente osteológicos, suportam a nova espécie como pertencente ao subgênero Plesiojenynsia. Apresenta-se uma nova hipótese de relações filogenéticas para o gênero, incluindo o novo táxon. A nova espécie, da bacia do Rio Iguaçu no Estado do Paraná, é diagnosticada pela seguinte combinação de caracteres: ausência do poro W do canal mandibular; processos epióticos longos nos adultos, dez raios na nadadeira anal; faixas dorso-lateral e mediano-lateral descontínuas e formadas por uma série de máculas nos flancos; faixa mediano-lateral descontínua anterior a origem da nadadeira dorsal; terceiro hipobranquial grande; e presença de dentes no quarto ceratobranquial dos adultos.